免疫亲和柱使用技巧:
1、上柱的样品溶液应该保持酸碱中性、无悬浮物、甲醇浓度不宜过高;
2、若样品为复杂样品,例如高蛋白、高油脂、酸性样品,可以将提取液分两次提取样品,可以提高提取效果;
3、样品过柱及甲醇洗脱速度要慢且均匀,约每秒1-2滴;
4、抗原抗体发生反应的最佳温度是在25℃左右,实验需要的环境温度最好是室温24℃-28℃,太高或太低的温度都会对回收率有一定的影响。在使用前需要恢复至室温再进行实验;
5、不要在无水状态下,琼脂容易干燥缩,影响质量;
6、储存条件为4℃-8℃。切记0℃以下的低温,因为缓冲液冻结,会严重影响亲和柱内的物理结构,对质量影响很大;
7、洗脱一般选择试剂甲醇,为增强洗脱效果可加大甲醇体积。
免疫亲和柱的选购要求:
柱容量抗体:抗体的性质决定了净化效果,抗体交叉反应多,净化的物质相对也多。厂家生产亲和柱会从成本角度考虑,那么就会出现不同的柱容量,亲和柱上连接的抗体越多,柱容量也相应增加,对客户来说高柱容量对于高污染样品减少了净化次数,降低了成本。
重要的指标:添加回收率是亲和柱的重要回收指标,再样品提取方法适当的条件下,添加回收是检测亲和柱性能的重要参考指标,请注意,空白样品的污染值应远远小于添加值,这样会减少误差。一般添加回收率应在80-110%之间为合格的亲和柱产品。
柱的吸附量:由于小分子在溶液中会吸附到凝胶上,在检查了添加回收率之后还应柱的吸附量,一般我们在洗脱步骤会给客户提供可靠的说明。
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